紫外衍生化方�
使用液相色譜最多的是紫外檢�(cè)器,為了使一些沒有紫外吸收或紫外吸收很弱的化合物能被紫外檢測(cè)器檢�(cè),往往要通過衍生化反�(yīng)在這些化合物的分子中引入有�(qiáng)紫外吸收的基�(tuán)。這些衍生物可被紫外檢�(cè)器檢�(cè)�
大多�(shù)紫外衍生反應(yīng)來自�(jīng)典的廣度分析和有�(jī)定量分析,新的衍生化反應(yīng)和衍生試劑隨液相色譜的發(fā)展而發(fā)�,這些反應(yīng)的原理都來自有機(jī)合成,所以就要求操作者對(duì)有機(jī)合成有所了解。但�,由于柱前衍生化是為色譜分析�(zhǔn)備樣�,需要衍生處理的樣品的含量水平和所參與的衍生化反應(yīng)過程與常量有�(jī)合成反應(yīng)相比有著明顯的不同,而是類似于近年來�(fā)展的微量有機(jī)合成,紫外衍生化反應(yīng)要求選擇反應(yīng)�(chǎn)率高、重�(fù)性好的反�(yīng)。過量試劑和試劑中的雜質(zhì)如果�(huì)干擾下一步的色譜分離和檢�(cè),則在色譜�(jìn)樣前要�(jìn)行純化分�。還要注意反�(yīng)介質(zhì)�(duì)紫外吸收的影�。下面分別介紹一些常用的反應(yīng)�
(1)苯甲?;�?yīng) 苯甲酰氯及其衍生物一�(duì)硝基苯甲酰氯�3�5-二硝基苯甲酰氯和�(duì)甲氧摹苯甲酰氯都可以同胺、醇和酚類化合物反應(yīng),生成強(qiáng)紫外吸收的苯甲酸酯類衍生物,過量試劑可以通過水解除去,反�(yīng)�(chǎn)物可用有�(jī)溶劑提取后直接�(jìn)��
(2) 2�4-二硝基氟代苯 (DNFB) 的反�(yīng) DNFB與醇的反�(yīng)�(chǎn)率很低,但可與大�
�(shù)伯胺、仲胺和氨基酸反�(yīng),生成強(qiáng)紫外吸收的苯胺類衍生��
(3) 苯基異硫氰酸� (PITC) 的反�(yīng) PITC可與氨基酸反�(yīng),生成苯基己�(nèi)酰硫脲衍生物PTH-氨基��
苯基異氰酸酯與醇類反�(yīng)生成苯基甲酸酯�
(4) 苯基磺酰氯的反應(yīng) 苯基磺酰氯可與伯胺和仲胺反應(yīng)�
甲苯磺酰氯可與多氨基化合物反�(yīng),不僅能提高其檢�(cè)是敏�,還可改變HPLC的分離度�
(5) 有機(jī)酸的酯化反應(yīng) 有機(jī)酸很容易與酰溴基反應(yīng)生成�,常用的酰溴基試劑有苯甲酰溴、甲氧基苯甲酰演、對(duì)溴基苯甲酰溴和對(duì)硝基苯甲酰溴�。酯化反�(yīng)在極性溶�(如乙�、丙酮或四氫呋喃)中�(jìn)�,有�(shí)需加催化劑,如冠醚加鉀離子、三乙胺或N-二異丙基胺等�
(6) 羰基化合物的反應(yīng) 醛類和酮類中的羰基可�2�4-二硝基苯� (DNPH) 反應(yīng)� 生成苯腙衍生物,反應(yīng)在弱酸條件下�(jìn)��
![]() |
|
![]() |